איך מכינים מלוחים שנאגרו בפוספט?
מלוחים שנאגרו בפוספט (PBS) הוא תערובת מלוחה המשמשת במחקר ביולוגי.
מלוחים שנאגרו בפוספט (PBS) הוא תערובת מלוחה המשמשת במחקר ביולוגי. הוא משמש לדילול קבוצת תאים או להפרדת תאים. חיץ זה שומר על pH יציב כך שהתאים לא נהרסים תוך כדי הסתכלות ואחסון. אתה יכול להכין פתרון 1X שניתן להשתמש בו ישירות בתאים או שאתה יכול להכין מלאי 10X שניתן לדלל עד 1X. אם המעבדה שלך משתמשת ב- PBS רב, זה יכול להיות רעיון טוב לעשות מלאי של 10X מכיוון שהיא תימשך זמן רב יותר.
שיטה 1 מתוך 3: הכנת מלאי 1x
- 1אסוף את החומרים והמרכיבים שלך. להכנת תמיסת 1X (הריכוז הרגיל המשמש לניסויים) של תמיסת מלח פוספט (PBS), תזדקק לגליל מדורג 1 ליטר, איזון, כוס 2 ליטר, מוט ערבוב, צלחת ערבוב, pH מטר, אוטוקלב ובקבוק זכוכית לאחסון. כדי להכין 1 ליטר PBS, תזדקק לכמויות הבאות של כל מרכיב:
- כמויות קטנות של HCl מדולל ו / או NaOH ל- pH הפתרון הסופי
- 800 מ"ל מים מזוקקים
- 8 גרם NaCl (נתרן כלורי)
- 0,2 גרם KCl (אשלגן כלורי)
- 1,44 גרם Na 2 HPO 4 (פוספט דו-נתרן)
- 0,24 גרם KH 2 PO 4 (חד-אשלגן פוספט)
- הריכוזים הסופיים של כל תרכובת צריכים להיות 137 מ"מ NaCl, 10 מ"מ Na 2 HPO 4, 1,8 מ"מ KH 2 PO 4, 2,7 מ"מ KCl ו- pH 7,4.
- 2מניחים את מוט המערבול בכוס ומניחים את הכוס על גבי צלחת הבוחש. כאשר אתה עושה פתרון כלשהו, אתה רוצה לשמור על פיתרון תמידי של הפיתרון. זה יעזור להכל להתמוסס מהר יותר. כדי למנוע התזה לאחר הוספת מים, הנח את מוט המיקסר בכוס הריקה ואז הניח אותו על גבי צלחת המיקסר.
- מוט ערבוב מכיל מגנט המאפשר לסביבון להסתובב ולערבב את התמיסה כאשר מונח מיכל נוזל על צלחת הערבול המכילה מנוע.
- המתן עד שיהיה פתרון בכוס לפני שתפעיל אותו.
- 3מדוד 800 מ"ל מים מזוקקים לכוס 2 ליטר, ואז הפעל את צלחת הערבול. בעת הכנת פתרון, התחל בפחות מים מהנפח הסופי. בסוף תוסיפו את שאר המים בכדי להעלות את הנפח הכולל ל -1 ליטר. בעזרת הגליל המדורג, מדדו 800 מ"ל מים ושפכו זאת ישירות לכוס נקייה.
- עם המים בכוס, הפעל את צלחת הערבול במהירות בינונית. אתה אמור לראות ג'קוזי קטן במים כאשר מוט המערבול מתחיל להסתובב.
- 4שקלו את הכמויות הראויות של כל חומר כימי. תשקלי 8 גרם של NaCl, 0.2 גרם של KCl, 1,44 g של Na 2 HPO 4, ו 0,24 g של KH 2 PO 4. השתמש באיזון לשקילת כל כימיקלים בכל פעם בסירות שקילה משלהם.
- אם אתה מוסיף יותר מדי כימיקל, פשוט הסר את העודף עד שיהיה לך את הכמות הנכונה.
- 5הוסף את כל הכימיקלים לתמיסה ונמס. יוצקים כל חומר כימי למים תוך כדי ערבוב. אין הזמנה מיוחדת להוסיף כל אחד, כך שתוכל להוסיף הכל בבת אחת. תנו להכל להמשיך ולערבב עד שהוא נמס לגמרי.
- אתה יכול לתת לזה לשבת בזמן שאתה עושה משהו אחר ולבדוק את זה אחר כך. זה ייקח לפחות 5-10 דקות להתמוסס.
- 6התאם את ה- ph של הפתרון ל- 7,4. לאחר שהכל התמוסס לחלוטין, עליך להתאים את ה- pH של החיץ עד שהוא 7,4. שמור על מוט המערבול והניח את מד ה- pH בחלקו העליון של התמיסה. תן למספרים במד ה- pH להפסיק לנוע. סביר להניח שהפתרון יהיה חומצי מדי, כך שתצטרך להוסיף נתרן הידרוקסיד (NaOH) כדי להתאים את ה- pH.
- השתמש בפיפטה קטנה כדי להוסיף NaOH כמה טיפות בכל פעם. לאחר כל הוספה, תנו לתמיסה לערבב לרגע ובדקו את הקריאה החדשה על מד ה- pH.
- התאמת ה- pH לתמיסה היא תהליך הדורש סבלנות. אם אתה עולה בטעות מעל 7,4, אתה יכול להוסיף כמה טיפות של חומצה הידרוכלורית (HCl) כדי להחזיר אותו למטה.
- 7הוסיפו את המים עד שהתמיסה היא ליטר אחד. לאחר התאמת ה- pH כראוי, תוכלו להעלות את הפתרון שלכם לנפח הסופי של ליטר אחד. שופכים בזהירות את כל התמיסה מהכוס לתוך הגליל המדורג 1 ליטר. הוסף מספיק מים מזוקקים כדי שיהיה 1 ליטר.
- יוצקים את הפתרון הסופי לבקבוק זכוכית 1 ליטר הבטוח לחיטוי.
- 8לעקר את הפתרון בחיטוי. הנח את המכסה על הבקבוק, אך אל תבריג אותו. במהלך החיטוי האוטומטי, הלחץ בבקבוק יכול להצטבר ולהתפוצץ אם מהדקים את המכסה. שים רצועת קלטת החיטוי על פני המכסה כדי להחזיק אותה במקום בזמן החיטוי.
- הגדר את החיטוי לעקר למשך 20 דקות ב 15 psi על מחזור הנוזל.
- קלטת החיטוי כוללת מחוון טמפרטורה. אם קלטת החיטוי לא הופכת לשחורה לאחר סיום התהליך, החיטוי לא נעשה חם מספיק ותצטרך לעקר מחדש.
- 9אחסן PBS בטמפרטורת החדר. לאחר החיטוי, תן ל- PBS להתקרר לטמפרטורת החדר ואז להדק את המכסה כדי לשמור על המזהמים בחוץ. הידוק המכסה לפני שהבקבוק מתקרר יכול ליצור ואקום ולהקשות מאוד על הסרת המכסה אחר כך. PBS יציב בטמפרטורת החדר.
- אתה יכול גם לחלק את ה- PBS למכלים קטנים יותר לשימוש אחד בכל פעם.
לאחר כל הוספה, תנו לתמיסה לערבב לרגע ובדקו את הקריאה החדשה על מד ה- pH.
שיטה 2 מתוך 3: הכנת מלאי פי 10
- 1אספו את החומרים והמרכיבים שלכם. הכנת מלאי 10X (פי עשרה מהריכוז הרגיל בשימוש) כמעט זהה להכנת מלאי 1X, פשוט מוסיפים פי 10 מכמות הכימיקלים. להכנת מלאי ה- 10X תצטרך צילינדר מדורג 1 ליטר, איזון, כוס 2 ליטר, מוט ערבוב, צלחת ערבוב, מד pH, אוטוקלב ובקבוק זכוכית לאחסון. כדי להכין 1-L תזדקק לכמויות הבאות של כל תרכובת:
- 700 מ"ל מים מזוקקים
- 80 גרם NaCl (נתרן כלורי)
- 2 גרם KCl (אשלגן כלורי)
- 14,4 g של Na 2 HPO 4 (disodium פוספט)
- 2,4 גרם KH 2 PO 4 (פוספט חד אשלגן)
- תצטרך גם כמויות קטנות של HCl ו / או NaOH כדי לפתור את הפתרון הסופי.
- הריכוזים הסופיים של כל תרכובת בתמיסה 10X הם 1,37 מ 'NaCl, 27 מ"מ KCl, 100 מ"מ Na 2 HPO 4 ו- 18 מ"מ KH 2 PO 4.
- 2מניחים את הכוס על גבי צלחת המיקסר ומוסיפים את מוט המערבב. כדי לעזור בהמסת הכל במהירות, השתמש במוט ערבוב ובצלחת ערבוב כדי לשמור על תמיכת התמיסה. מניחים את מוט המערבול בכוס הריקה לפני שמתחילים, כדי למנוע התזות.
- המתן עד שיש פתרון בכוס לפני שמדליקים את צלחת הערבול.
- 3מדוד 700 מ"ל מים מזוקקים לכוס 2 ליטר, ואז הפעל את צלחת הערבול. אתה רוצה להתחיל בפחות מהנפח הסופי מכיוון שהנפח ישתנה ככל שתוסיף אליו את התרכובות. לאחר שהכל התווסף והתמוסס, תוסיפו את שאר המים בכדי להעלות את הנפח הכולל ל -1 ליטר. מדוד 700 מ"ל מים עם הגליל המדורג ויוצקים זאת ישירות לכוס נקייה.
- לאחר הוספת מים, הפעל את צלחת הערבול במהירות בינונית. אתה אמור לראות ג'קוזי קטן נוצר במים כאשר מוט המערבבים מתחיל להסתובב.
- 4שקלו את הכמויות הראויות של כל חומר כימי. תשקלי 80 גרם של NaCl, 2 גרם של KCl, 14,4 g של Na 2 HPO 4, ו 2,4 גרם של KH 2 PO 4. שקלו כל כימיקל בנפרד בסירת משקל משלהם.
- אם אתה מוסיף יותר מדי כימיקל, פשוט הסר את העודף עד שיהיה לך את הכמות הנכונה.
- 5ממיסים את כל הכימיקלים שבתמיסה. הוסף כל חומר כימי למים בזמן שהוא מערבב. אין הזמנה מיוחדת להוסיף כל אחד, כך שתוכל להוסיף הכל בבת אחת. המשיכו לבחוש עד להמסה מלאה של כל האבקה.
- זה ייקח לפחות 5-10 דקות להתמוסס, אז תן לזה להתערבב ולבדוק את זה אחר כך.
- 6ודא שה ph של הפתרון הוא 7,4. כאשר הכל מומס במלואו, עליכם לבדוק את ה- pH של החיץ ולהתאים אותו ל- 7,4. שמור על מוט המערבול והשקיע את קצה מד ה- pH בחלקו העליון של התמיסה. תן למספרים במד ה- pH להפסיק לנוע כדי למדוד את ה- pH הנוכחי. סביר להניח שהפתרון יהיה חומצי מדי, כך שתצטרך להוסיף נתרן הידרוקסיד (NaOH) כדי להפוך אותו לבסיסי יותר.
- השתמש בפיפטה קטנה כדי להוסיף NaOH כמה טיפות בכל פעם. לאחר כל תוספת, תן לתמיסה לערבב לרגע והמתין עד שהמספרים יפסיקו לנוע. המשך להוסיף NaOH עד שתגיע ל 7,4.
- ל- pH פתרון הוא תהליך הדורש סבלנות. אם אתה עולה בטעות מעל 7,4, אתה יכול להוסיף כמה טיפות של חומצה הידרוכלורית (HCl) כדי להחזיר אותו למטה.
- 7הוסף מים כדי להפוך את הנפח הסופי לליטר. כאשר ה- pH מותאם כראוי, הביא את התמיסה לנפח הסופי של ליטר אחד. שופכים בזהירות את כל התמיסה מהכוס לתוך הגליל המדורג 1 ליטר. הוסף מספיק מים מזוקקים כדי שיהיה 1 ליטר.
- יוצקים את הפתרון הסופי לבקבוק זכוכית 1 ליטר הבטוח לחיטוי.
- 8השתמש בחיטוי כדי לעקר את הפתרון. הנח את המכסה על הבקבוק, אך אל תבריג אותו עד הסוף. תהליך החיטוי מייצר קיטור אשר עלול לגרום להצטברות של לחץ בתוך הבקבוק. אם המכסה מהודק הבקבוק יכול להתפוצץ. השתמש ברצועת קלטת החיטוי על פני המכסה כדי להחזיק אותה במקום בזמן החיטוי.
- הגדר את החיטוי לעקר למשך 20 דקות ב 15 psi על מחזור הנוזל.
- קלטת החיטוי כוללת מחוון טמפרטורה. אם הוא מגיע לטמפרטורה הנכונה, הקלטת תשחיר. אם הקלטת לא תשחיר, החיטוי לא התחמם מספיק ותצטרך לעקר מחדש.
- 9שמור PBS מאוחסן בטמפרטורת החדר. לאחר החיטוי, תן ל- PBS להתקרר לחלוטין לפני הידוק המכסה. אם מהדקים את המכסה כשהוא עדיין חם, זה יכול ליצור ואקום שיקשה מאוד על הסרת המכסה אחר כך. PBS יציב לטווח ארוך בטמפרטורת החדר.
- אתה יכול גם לחלק את ה- PBS למכלים קטנים יותר לשימוש אחד בכל פעם.
כדי למנוע התזה לאחר הוספת מים, הנח את מוט המיקסר בכוס הריקה ואז הניח אותו על גבי צלחת המיקסר.
שיטה 3 מתוך 3: דילול מלאי 10x ל- 1x
- 1קבעו את כמות הפתרון 1x שתזדקקו לו. ראשית, עליכם לדעת כמה מניות 1X אתם רוצים לפני שתוכלו לחשב כמה מניות 10X תזדקקו. הסכום שייעשה יהיה תלוי בסוג הניסוי שאתה מבצע.
- אם אתה רק צריך כמות של מלאי 1X שיהיה לך, הכין כ 500 מ"ל. אתה יכול להשתמש במניה 1X לזמן מה ולא תצטרך לבצע אותה בתדירות גבוהה.
- 2חשב את כמות המניות פי 10 הנחוצה. כדי לחשב את כמות המניות 10X הנחוצים, פשוט מחלקים את הנפח הכולל שלך ל- 10. זכור, כדי לקבל את הנפח הנכון, היחידות שלך חייבות להתאים: אם הנפח שאתה מייצר הוא במיליליטר, הנפח שאתה מוסיף יהיה במיליליטר.
- לדוגמא: אם אתה רוצה 500 מ"ל של פתרון, חלק 500 על 10 ותקבל 50 מ"ל. אתה צריך 50 מ"ל של 10X מלאי כדי להכין 500 מ"ל של 1X.
- לדוגמא: אם אתה רוצה 2 ליטר של פתרון, חלק 20 וקבל 0,2 ל '. אתה יכול להמיר את זה למ"ל על ידי הכפלת 1000. אתה צריך 200 מ"ל של מלאי 10X כדי להכין 2 ליטר של 1X.
- 3הפחת את עוצמת הקול פי 10 מהנפח הכולל. כדי לקבוע את כמות המים הדרושה לדילול מלאי ה- 10X, עליכם להפחית את נפח ה- 10X המחושב מהנפח הכולל הרצוי.
- לדוגמא: כדי להכין 500 מ"ל, אתה צריך 50 מ"ל של 10X מלאי. מאז 500 - 50 = 450, אתה צריך 450 מ"ל של מים מזוקקים כדי לדלל את המלאי.
- 4לדלל את המניה פי 10 במים מזוקקים. בעזרת הנפחים שחישבתם הוסיפו מים מזוקקים למלאי ה- 10X. ביצעת כעת מניה 1X של PBS.
- לדוגמא, הוסף 50 מ"ל של מלאי 10X ל -450 מ"ל של מים מזוקקים כדי להפוך 1X PBS מלאי. מערבולת את המיכל כדי לערבב את התמיסה.
- 5בדוק את ה- ph של המניה 1x. לפעמים תהליך הדילול משפיע על ה- pH של המאגר. זה זהיר לבדוק את ה- pH של המניה 1X ולוודא שזה ב 7,4 בעקבות דילול.
- השתמש במד ה- pH כדי למדוד את ה- pH והשתמש ב- HCl או NaOH כדי לתקן את המאגר ל- pH של 7,4.
מניחים את מוט המערבול בכוס ומניחים את הכוס על גבי צלחת הבוחש.
- הכימיקלים המשמשים לייצור PBS הם כולם בטוחים לטיפול, אך חשוב ללבוש ציוד מגן מתאים בכל עת במעבדה.
- ללבוש כפפות, מעיל מעבדה והגנה על העיניים בזמן שאתה נמצא במעבדה.
- עקוב תמיד אחר פרוטוקולי הבטיחות בעבודה במעבדה.
- למרות שאינך זקוק להם בכדי להכין PBS, דע תמיד איפה מקלחות העיניים שלך ועיניים.
קרא גם: איך להרוג נבל בסיפור?
