איך מכינים מלאי גליצרול?
תשתמש באותו מיכל כדי להחדיר את תמיסת הגליצרול לתרבית החיידקים הנוזלית ולהניח את הדגימה לאחסון קר.
מלאי גליצרול הוא סוג של השעיה המשמש בסביבות מעבדה לאחסון תרביות חיידקים לפרקי זמן ממושכים. כאשר מוסיפים תרביות חיידקים נוזליים לתמיסת גליצרול של 50%, הגליצרול מחדיר לתאי החיידק, מה שהופך אותם ליציבים מבנית ומאפשרים לאחסן אותם בבטחה. לאחר ערבוב הדגימות, הקפיאו אותן ב -80 מעלות צלזיוס (-44 מעלות צלזיוס) כדי להבטיח שהן יישארו קיימא זמן רב ככל האפשר.
חלק 1 מתוך 3: ערבוב תמיסת הגליצרול
- 1הכן תרבית נוזלית של החיידקים שברצונך לאחסן. על מנת שמלאי גליצרול יהיה יעיל, יש לשלב אותו עם תרבית חיידקים נוזלית. הפקת תרבית נוזלית תדרוש ממך דגירה של דגימת חיידק בן לילה בבקבוק ארלנמייר מלא במרק ליזוגני ובריכוז נכון של אנטיביוטיקה.
- לאחר שהכנתם תרבית נוזלית, תוכלו להכניס את החיידקים לאחסון או להמשיך לבודד את ה- DNA של הפלסמיד.
- מרק ליזוגני (המכונה גם "מרק LB" ו"נוזל LB ") הוא סוג של נוזל עשיר בחומרים מזינים המשמש להפצת חיידקים במהירות. ניתן לרכוש אותו מקמעונאי שמוכר ציוד וחומרי מעבדה.
- דגירת תרבויות חיידקים היא תהליך טכני ביותר הכולל משתנים רבים ושונים. מסיבה זו, היא מתבצעת בצורה הטובה ביותר על ידי טכנאי מיומן בסביבת מעבדה מבוקרת.
- 2לדלל גליצרול טהור במים מזוקקים ליצירת תמיסת גליצרול של 50%. השתמש פיפטה סטרילית כדי למדוד 10 מ"ל של שני הנוזלים ולשלב אותם בבקבוק יחיד. מערבבים או מנערים את הבקבוק ביסודיות עד לערבוב אחיד של הנוזלים.
- דילול הגליצרול הכרחי בכדי למנוע את פגיעה בתאי החיידק.
- יש מדענים שמעדיפים להשתמש בתמיסה של גליצרול עד 15-40% על מנת להימנע מפגיעה בתרבית החיידקים. עם זאת, תערובת של 50% תספק אורך חיים מרבי באחסון.
הפרופורציות הסופיות של מלאי הגליצרול שלך צריכות להיות 50% חיידקים ו- 50% גליצרול מדולל. - 3העבר 50 מיקרוליטר של תמיסת גליצרול 50% לצינור microfuge. העבר את הגליצרול המדולל לבקבוקון החדש בזהירות כדי למנוע נזילות. תשתמש באותו מיכל כדי להחדיר את תמיסת הגליצרול לתרבית החיידקים הנוזלית ולהניח את הדגימה לאחסון קר.
- במידת האפשר, השתמש בצינור עם חלק העליון של הברגה ולא עם אחד עם החלק העליון של הצמד. ידוע כי צינורות הצמדה העליונים נפתחים בטעות במהלך ערבוב ואחסון ממושך.
חלק 2 מתוך 3: הוספת תרבית החיידקים
- 1הוסף 50 מיקרוליטר מתרבית החיידקים הנוזלים שלך לפתרון. השתמש בפיפטה טרייה כדי למדוד כמות שווה של התרבות הנוזלית ולשפוך אותה ישירות לתמיסת הגליצרול בצינור. הפרופורציות הסופיות של מלאי הגליצרול שלך צריכות להיות 50% חיידקים ו- 50% גליצרול מדולל.
- שימוש בכמויות לא פרופורציונליות של גליצרול ותרבית נוזלית עלול להשפיע על קשיחות החיידקים ולהפחית את משך הזמן בו הוא מסוגל לשרוד באחסון קר.
- אם אתה משתמש בתמיסת גליצרול עם ריכוז נמוך יותר, יהיה עליך להתאים את כמות תרבית החיידקים בהתאם. עיין בספרות המתייחסת למתח המדויק שאחסנת למידע נוסף.
- 2הניחו את המכסה על הצינור. הברג את המכסה למקומו, או לחץ כלפי מטה עד שתשמע קליק רך אם אתה משתמש בצינור עליון. ודא שהמכסה תקין לפני שתמשיך הלאה.
על מנת שמלאי גליצרול יהיה יעיל, יש לשלב אותו עם תרבית חיידקים נוזלית. - 3לנער את הצינור בעדינות כדי לערבב את תרבית החיידקים וגליצרול. הקציפו את הצינור קדימה ואחורה כמה פעמים עד ששני הנוזלים מפוזרים באופן שווה. בשלב זה, תאי החיידק יתחילו לאט לאט לספוג את תמיסת הגליצרול, שתייצב ותגן על קרום התא מפני הידרדרות ונזק הקשור לטמפרטורה.
- שמור על האגודל שלך לחוץ בחוזקה על מכסה צינור המיקרו פיג 'תוך כדי טלטול כדי לוודא שהוא לא ישתחרר.
חלק 3 מתוך 3: אחסון והחייאת תרבויות חיידקים
- 1תייג את דגימת החיידק. כתוב את שם התרבות על גבי תווית קטנה של מבחנה או על רצועת נייר דבק והדבק אותה לצינור המיקרו פיוג 'שם היא תיראה בבירור. אתה יכול גם לרשום את פרטי הסיווג של החיידק ישירות על המכסה באמצעות סמן בעל לב.
- הקפידו לרשום גם כל מידע אחר שעשוי להועיל במהלך הניתוח, כגון זן המדגם המדויק או מקורו.
- תיוג מכולות המדגם שלך הוא שלב הכרחי בתהליך האיסוף, מכיוון שהוא מאפשר לך לעקוב אחר תכולתן תוך כדי דשדוש בתוך האחסון ומחוצה לו.
- 2הקפיאו את הדגימה ב -80 מעלות צלזיוס (-44 מעלות צלזיוס). מניחים את המדגם שכותרתו במקפיא מעבדה מקוררים במיוחד המוגדרים לטמפרטורה קבועה של -80 מעלות צלזיוס (-44 מעלות צלזיוס). כאשר הוא נשמר בתנאים אלה, תרבית החיידקים תישאר קיימא למשך מספר שנים.
- זה קריטי שטמפרטורת המקפיא תישאר קבועה ב -80 מעלות צלזיוס (-444 מעלות צלזיוס). אם זה מוגדר חם יותר, החיידקים המשומרים עלולים למות.
כאשר מוסיפים תרביות חיידקים נוזליים לתמיסת גליצרול של 50%, הגליצרול מחדיר לתאי החיידק, מה שהופך אותם ליציבים מבנית ומאפשרים לאחסן אותם בבטחה. - 3מגרדים כמות קטנה של חיידקים קפואים כדי להכין אותה לניתוח. כשמגיע הזמן להחיות את הדגימה שלך, הסר את צינור המיקרו-פיוג ממקפיא ופתח את המכסה. השתמש בלולאת חיסון סטרילית, קיסם או קצה פיפטה כדי לאסוף כמות קטנה של חומר קפוא מהחלק העליון של הדגימה ולהפשיט את החיידקים לצלחת אגר LB לבדיקה או לבדיקה.
- היזהר שלא לתת לחיידקים שמתגרדים. זה עשוי לעזור לשמור על צינור המלאי על קרח יבש עד שתסיים את הבדיקות.
- הוצא את הדגימה שלך מהמקפיא רק במידת הצורך. הפשרה והקפאה חוזרת ותקטין את תוחלת החיים שלה במידה ניכרת.
- תרבות חיידקית
- מרק LB
- בקבוק ארלנמאייר
- בורג צינור מיקרו פיג ' עליון
- פיפטה סטרילית
- מקפיא מעבדה מקורר במיוחד
- צלחת אגר LB
- לולאת חיסון או קיסם
- תווית מבחנה או נייר דבק
- סמן בעל קצות לבד או עט דיו
קרא גם: כיצד לבצע נייר CAU למדע GCSE?
