כיצד לבצע בדיקת ELISA (בדיקת חיסון מקושרת לאנזים)?
ELISA (Assay-linked immunosorbent assay) היא בדיקה המאתרת את ריכוז הפתוגנים והאלרגנים הנמצאים בנוזל הנבדק.
חלק 1 מתוך 4: הגדרה
- 1מקם את כל החומרים בהישג יד על משטח העבודה.
- 2מניחים רצועות בארות מצופות ולא מצופות במגש בכיוון נוח.
- 3תיבת פתיחה של טיפים.
- 4הנח טיפ בקצה פיפטה הערוץ היחיד.
- 5לשאוב 100μl של דגימת בקרה אחת בערכה ולחלק אותו למיקרוגל אחד לא מצופה.
- 6חזור על שני השלבים האחרונים עבור כל בקרת ערכה וכל דגימה הנבדקת.
חלק 2 מתוך 4: דגירת דגימה ראשונית
- 1מניחים טיפים חד פעמיים בכל קצה של פיפטה רב-ערוצית.
- 2לשאוב 100μl מרצועת בארות לא מצופות באמצעות פיפטה רב-ערוצית ולחלק לרצועה של בארות מצופות.
- 3השלך את העצות מהפיפטה הרב-ערוצית לכלי פסולת סמוך.
- 4מערבולת מגש מיקרוגל במשך 20 שניות בתנועה מעגלית חלקה ללא הרמה.
- 5המתן למשך הזמן המתאים שצוין לביצוע ELISA.
- 6רוקן בארות לכיור כשחלף הזמן המתאים, תוך שימוש בדחיפה חזקה כלפי מטה עם בארות הפוכות.
- 7הסר את הרצועה עם הבארות הלא מצופות.
- 8מלא בקבוק כביסה בתמיסת כביסה מתאימה.
- 9שטפו כל באר עם בקבוק כביסה 5 פעמים.
- 10הפוך את צלחת המיקרוגל והטפיחה על משטח מכוסה במגבת נייר.
- 11הניחו את צלחת המיקרוגל הנקייה עם הפנים כלפי מעלה על השולחן.
דגימות נוזליות להיבדק באמצעות ערכת ELISA (אסור לחרוג מהבארות הזמינות פחות בקרות בערכה).
חלק 3 מתוך 4: דגירה מצומדת
- 1קח מאגר פיפטה אחד ומלא במגיב המצומד המתאים.
- 2קח את הפיפטה הרב-ערוצית, הניח טיפים חד פעמיים בכל קצה ושאב 100μl מהמאגר המלא בצמידה.
- 3לוותר לרצועת בארות מצופות.
- 4השלך את העצות מהפיפטה הרב-ערוצית לכלי פסולת סמוך.
- 5מערבולת מגש מיקרוגל במשך 20 שניות בתנועה מעגלית חלקה ללא הרמה.
- 6המתן למשך הזמן המתאים שצוין לביצוע ELISA.
- 7רוקן בארות לכיור כשחלף הזמן המתאים, תוך שימוש בדחיפה חזקה כלפי מטה עם בארות הפוכות.
- 8שטפו כל באר עם בקבוק כביסה 5 פעמים.
- 9הפוך את צלחת המיקרוגל והטפיחה על משטח מכוסה במגבת נייר.
- 10הניחו את צלחת המיקרוגל הנקייה עם הפנים כלפי מעלה על השולחן.
חלק 4 מתוך 4: מצע / דגירה סופית
- 1קח מאגר פיפטה אחד ומלא את ריאגנט המצע המתאים.
- 2קח את הפיפטה הרב-ערוצית, הניח טיפים חד פעמיים בכל קצה ושאב 100μl מהמאגר מלא במצע.
- 3לוותר לרצועת בארות מצופות.
- 4השלך את העצות מהפיפטה הרב-ערוצית לכלי פסולת סמוך.
- 5מערבולת מגש מיקרוגל במשך 20 שניות בתנועה מעגלית חלקה ללא הרמה.
- 6המתן למשך הזמן המתאים שצוין לביצוע ELISA.
- 7קח מאגר פיפטה אחד ומלא במגיב העצירה האדום המתאים.
- 8קח את הפיפטה הרב-ערוצית, הניח טיפים חד פעמיים בכל קצה ושאב 100μl מהמאגר מלא בכיבוי עצירה אדום.
- 9רוקן את הנוזל שנשאב לרצועת המיקרו-מילים שכבר התמלאה.
- 10מערבולת צלחת מיקרוגל למשך 20 שניות בתנועה חלקה עם כיוון השעון מבלי להרים.
- 11מניחים את מגש המיקרוגל בקורא צלחות המיקרוגל של ELISA תוך 10 דקות לקבלת תוצאות מיטביות.
מניחים את מגש המיקרוגל בקורא צלחות המיקרוגל של ELISA תוך 10 דקות לקבלת תוצאות מיטביות.
- ניתן להשתמש בפלטה מסתובבת במקום להסתחרר ביד.
- צלחת מיקרוגל של 8x12 ריקה (חייבת להיות תואמת לרצועות המיקרוגל; עשויה להיות בערכה)
- קורא מיקרו פלטות ELISA
- פיפטה של ערוץ יחיד
- רב פיפטה 8 ערוצים
- קופסה 8x12 מלאה בטיפים חד פעמיים (חייבת להיות תואמת לפיפטות בשימוש)
- שטפו בקבוק עם קצה פלסטיק מעוגל
- 3 מאגרי פיפטה
- מגבת נייר
- דגימות נוזליות לבדיקה באמצעות ערכת ELISA (אסור לחרוג מהבארות הזמינות פחות בקרות בערכה)
- ערכת ELISA להיבדק (חייבת להיות תואמת לדוגמאות שנבדקות)
- הוראות ערכה עם זמני המתנה
- ריאגנט מצומד
- מגיב מצע
- מגיב לעצור אדום
- דגימות נוזליות המשמשות כבקרה
- רצועת מיקרוגל של 12 בארות לא מצופות (חייבת להיות תואמת לפלטת המיקרוגל)
- רצועת מיקרוגל של 12 בארות מצופות (חייבת להיות תואמת לפלטת המיקרוגל)
- שוטפים תמיסה
קרא גם: איך מכינים ג'ל מים?
